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为什么凝胶色谱法要用葡聚糖?
以凝胶为固定相的色谱,称为凝胶色谱。葡聚糖凝胶的分离原理是葡聚糖凝胶在吸水后形成凝胶粒子,在其交联键的骨架中有许多一定大小的网眼。
网眼大,大分子物质能进入网眼内;网眼小,只有小分子物质才能进入网眼;而超过一定限度的大分子物质,就被排阻在凝胶粒子的外部而不能进入网眼。
这就使得能进入凝胶内部与不能进入凝胶内部的分子,如同按照分子大小过筛一样,所以称为分子筛。
操作时首先将凝胶在适宜的溶剂中浸泡,使其充分膨胀,然后再铺成薄层,加入样品后,再以同一溶剂洗脱,则样品中大分子化合物不能进入凝胶颗粒内部,只在凝胶颗粒间移动,因此阻力小,行动快,走在前面;而小分子化合物能自由扩散进入到凝胶内部,因此在色谱时受到的阻力较大,行动慢,走在后面。
如此经过一段时间的洗脱,混合物中各组分就会按照分子的大小而获得分离。
凝胶色谱与吸附色谱区别?
吸附色谱,利用固定相吸附中对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离,吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。
凝胶色谱,是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。
所以,胶凝色谱和吸附色谱的区别:凝胶色谱,是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。吸附色谱利用固定相吸附中对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离,吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。
凝胶色谱法和电泳的区别是什么?都可以测DNA吗?
凝胶色谱法用来分离和提纯蛋白质和
SDS凝胶电泳法主要是检验蛋白质的纯度
意思是你先用凝胶色谱法提取蛋白质,然后可以用SDS凝胶电泳法来检验提取的蛋白质的纯度。凝胶色谱法分离蛋白质的原理:由于蛋白质的形状、大小、吸附性质、亲和力等性质都有差别,所以不同分子量的蛋白质通过多孔凝胶颗粒的间隙的流动速度不同、路程长短也不同;分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙的路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部的路程长,流动慢。
区别:凝胶电泳以葡聚糖凝胶电泳为例,要铺一块凝胶板,然后在板一端点样,通电,由于样品带电子,向正极方向移动,分子量大的跑的慢,小的跑得快,然后可以染色观察。它的作用一般是分离核酸。凝胶色谱一般是指色谱柱,从上段加样之后大分子物质难以进入凝胶空隙,从边上流,而小分子就容易进入凝胶空隙,因此大分子流出的速度更快,这种方法主要用途是给高聚物分级(但是实验用那一次是用来分离分子量不同的蛋白质的)。
凝胶色谱法透析的目的?
凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布,同时根据所用凝胶填料不同,可分离脂溶性和水溶性物质,分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也广泛用于小分子化合物。相对分子质量相近而化学结构不同的物质,不可能通过凝胶渗透色谱法达到完全分离纯化的目的。
凝胶色谱不能分辨分子大小相近的化合物,相对分子质量相差需在10%以上才能得到分离。
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